PTH CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401280

概要

副甲状腺ホルモン（PTH）は主に副甲状腺の主細胞で産生される内分泌ペプチドで、腎臓および骨に作用することで全身のカルシウムおよびリン酸の恒常性を維持します。PTHはPTH1Rに結合することでGs/cAMP/PKA系およびGq/PLC系のシグナル伝達を活性化し、骨芽細胞—破骨細胞のカップリングや、ビタミンD活性化の調節を含む腎尿細管でのカルシウム・リン酸の取り扱いを制御します。PTHによるシグナルはFGF23–Klotho経路などのミネラル代謝ネットワークとも相互作用し、骨および腎の細胞種における下流の転写プログラムに影響を及ぼします。PTHの発現やシグナル伝達の破綻は、ミネラルイオンバランスや骨リモデリングの異常に関連しており、内分泌学・骨生物学・腎臓学のモデルにおける機序研究の有用な切り口となります。

PTH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPTH遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PTH内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PTHのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PTHタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PTHシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PTH欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PTHの機能に不可欠なPTHエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PTHゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PTH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPTH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PTH遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PTH HDRプラスミド（h）および PTH HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPTHホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPTH標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。