Plasmide CRISPR d'Activation (h) PTBP-2: sc-404312-ACT

Le gène humain **PTBP2** code la protéine de liaison à l’ARN **PTBP-2**, un régulateur de l’épissage alternatif des pré-ARNm enrichi dans les neurones, qui influence l’inclusion des exons, la stabilité des ARNm et la traduction au cours de la neurogenèse et de la maturation synaptique. PTBP-2 coordonne la sélection des sites d’épissage sur des transcrits impliqués dans la différenciation neuronale, le remodelage du cytosquelette et l’expression génique dépendante de l’activité, en s’intégrant à des réseaux de régulation post‑transcriptionnelle qui façonnent l’identité cellulaire. Des altérations de l’expression de PTBP2 ou des programmes d’épissage associés ont été liées à un développement neuronal dérégulé et à des profils anormaux de maturation de l’ARN observés dans des contextes de maladies neurodéveloppementales et neurodégénératives. En tant que modulateur de l’équilibre entre isoformes de transcrits, PTBP-2 est largement étudiée pour relier les décisions d’épissage à l’engagement de la lignée neurale et à la fonction neuronale.

PTBP-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PTBP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PTBP-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PTBP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PTBP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PTBP-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PTBP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PTBP-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PTBP-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de PTBP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.