PSS2 Double Nickase Plasmid (h): sc-404133-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PSS2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PSS2 Double-Nickase-Plasmid (h) und PSS2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PTDSS2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PSS2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404133-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PSS2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404133-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PTDSS2 kodiert die Phosphatidylserin-Synthase 2 (PSS2), ein Enzym der Membran des endoplasmatischen Retikulums, das die Bildung von Phosphatidylserin über einen Basenaustausch unter Verwendung von Phosphatidylethanolamin katalysiert. Diese Aktivität unterstützt das Remodelling von Glycerophospholipiden, die Membranbiogenese und die Homöostase von Organellen und beeinflusst nachgeschaltete Prozesse wie die apoptotische Signalgebung, bei der die Externalisierung von Phosphatidylserin als wichtiger zellulärer Hinweisreiz dient. Die von PTDSS2 abhängige Lipidzusammensetzung kann den vesikulären Transport, ER-Stressantworten und die lipidvermittelte Signaltransduktion modulieren. Veränderungen im Phosphatidylserin-Stoffwechsel und im ER-Lipidgleichgewicht wurden in verschiedenen Krankheitskontexten, einschließlich der krebsassoziierten metabolischen Umprogrammierung, mit fehlregulierten Wachstums- und Überlebenswegen in Verbindung gebracht.
PSS2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PTDSS2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PTDSS2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PTDSS2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PTDSS2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.