Plasmide CRISPR d'Activation (h) PSS2: sc-404133-ACT

Le gène humain **PTDSS2** code la **phosphatidylsérine synthase 2 (PSS2)**, une enzyme membranaire du réticulum endoplasmique qui catalyse la production de phosphatidylsérine par échange de base avec la phosphatidyléthanolamine. En contrôlant l’abondance cellulaire de phosphatidylsérine, PSS2 contribue à réguler la biogenèse des membranes, l’homéostasie des organites, le trafic vésiculaire et des processus de signalisation dépendants des lipides qui influencent l’apoptose et l’élimination phagocytaire. L’activité de PTDSS2 est étroitement liée aux voies de remodelage des phospholipides et aux échanges lipidiques entre le RE et les mitochondries, modulant ainsi la fonction mitochondriale et les réponses cellulaires au stress. Un dérèglement du métabolisme de la phosphatidylsérine a été associé à des phénotypes de croissance et de survie altérés dans le cancer, ainsi qu’à des défauts membranaires plus larges touchant le métabolisme et la neurobiologie, ce qui fait de PTDSS2 une cible utile pour des études mécanistiques.

PSS2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PTDSS2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PSS2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PTDSS2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PTDSS2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PSS2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PTDSS2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PSS2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PSS2 dans les cellules tumorales présentant une expression de PTDSS2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.