Plásmido CRISPR de Activación (m) PSMD1: sc-427651-ACT

El gen Psmd1 de ratón codifica PSMD1, una subunidad central no ATPasa de la partícula reguladora 19S del proteasoma 26S, que contribuye a la degradación de proteínas dependiente de ubiquitina y al mantenimiento de la proteostasis. Al favorecer el reconocimiento y el procesamiento de sustratos poliubiquitinados, PSMD1 influye en la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés y los resultados de señalización que dependen del recambio proteico regulado, incluidas vías vinculadas a la actividad de NF-κB y a las respuestas al daño del ADN. La alteración de componentes reguladores del proteasoma puede remodelar el procesamiento de antígenos, la adaptación metabólica y la sensibilidad a la apoptosis, lo que convierte a Psmd1 en un nodo útil para estudiar fenotipos asociados a la proteostasis en modelos celulares y tisulares de ratón. La disfunción del proteasoma se asocia de manera amplia con estados inflamatorios y la transformación oncogénica, aportando un contexto mecanístico para la exploración de vías centradas en PSMD1 sin implicar resultados terapéuticos.

PSMD1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Psmd1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PSMD1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Psmd1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Psmd1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PSMD1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Psmd1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PSMD1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PSMD1 en células tumorales con expresión de Psmd1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.