Plasmide CRISPR d'Activation (h) PSM: sc-401947-ACT

FOLH1 code l’antigène membranaire spécifique de la prostate (PSMA/PSM), une métallopeptidase transmembranaire de type II dotée d’une activité de carboxypeptidase du glutamate, qui module le métabolisme extracellulaire des folates et la signalisation glutamatergique. Dans les tissus périphériques, FOLH1 contribue au traitement des folates polyglutamylés, soutenant le métabolisme à un carbone et la biosynthèse des nucléotides, tandis que dans le système nerveux il agit comme NAALADase pour hydrolyser le N‑acétylaspartylglutamate et influencer la disponibilité synaptique du glutamate. PSMA est également exprimé dans la néovascularisation associée aux tumeurs et dans des contextes de lignée prostatique, ce qui rend la régulation de FOLH1 pertinente pour l’étude des programmes angiogéniques, de la reprogrammation métabolique et de la biologie des enzymes de surface cellulaire au sein des microenvironnements associés au cancer. Ces fonctions relient FOLH1 à des voies qui gouvernent l’utilisation des nutriments, le traitement extracellulaire des peptides et les changements d’état cellulaire dépendants des signaux.

PSM Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FOLH1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PSM Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FOLH1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FOLH1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PSM. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FOLH1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PSM au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PSM dans les cellules tumorales présentant une expression de FOLH1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.