PSF CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-427964

概要

Sfpqは、スプライシング因子であるプロリン／グルタミンリッチタンパク質PSFをコードしている。PSFは多機能なRNA・DNA結合性の制御因子で、NEAT1などの長鎖ノンコーディングRNAとの相互作用を介して、pre-mRNAスプライシング、転写制御、核内パラスペックルの生物学を協調的に調節する。マウス細胞では、PSFはRNAプロセシングの忠実性、選択的スプライシングの決定、転写とRNA成熟の連携に寄与するとともに、DNA損傷応答に関連するゲノム維持過程にも関与する。これらの作用を通じて、Sfpqは細胞周期制御、神経分化、ストレス適応シグナル伝達に影響する広範な遺伝子発現プログラムを制御する。SFPQ/PSFの機能異常や局在異常は、RNA代謝の変調や神経変性に関連する表現型と関連付けられており、RNA結合タンパク質ネットワークの機構研究における有用な標的となる。

PSF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSfpq遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sfpq内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sfpqのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PSFタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PSFシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sfpq欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PSFの機能に不可欠なSfpqエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sfpqゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PSF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPSF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sfpq遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PSF HDRプラスミド（m）および PSF HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSfpqホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSfpq標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。