PSD-95 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400830

概要

DLG4はPSD-95をコードしており、PSD-95はシナプス後肥厚（PSD）を構成する中核的な足場タンパク質として、NMDA受容体およびAMPA受容体複合体を係留・集積させ、下流シグナルへ結び付けることでグルタミン酸作動性シナプスを組織化します。PSD-95はPDZ、SH3、GK各ドメインを介して、シナプス受容体の輸送、活動依存的可塑性、細胞骨格リモデリングを協調的に制御し、興奮性神経伝達とスパイン成熟を調節する経路を統合します。DLG4/PSD-95の機能やシナプス局在の変化は、回路形成および興奮性—抑制性バランスにおける役割を反映して、神経発達・精神神経疾患関連の表現型に関与すると示唆されています。ハブタンパク質としてのPSD-95は、学習・記憶の機構、シナプススケーリング、神経シナプスにおけるプロテオスタシスの研究で頻繁に解析されています。

PSD-95 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDLG4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DLG4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DLG4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PSD-95タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PSD-95シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DLG4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PSD-95の機能に不可欠なDLG4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DLG4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PSD-95 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPSD-95 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DLG4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PSD-95 HDRプラスミド（h）および PSD-95 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDLG4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDLG4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。