Plasmide CRISPR d'Activation (h) PRX1: sc-405108-ACT

PRRX1 code la protéine à homéoboîte apparentée PRX1, un facteur de transcription qui régule les décisions de destinée des cellules mésenchymateuses au cours du développement et du remodelage tissulaire. PRX1 influence les programmes de transition épithélio-mésenchymateuse (TEM), l’activation des fibroblastes et l’organisation de la matrice extracellulaire en coordonnant des réseaux transcriptionnels impliqués dans la migration, l’adhérence et la différenciation. En biologie humaine, une activité altérée de PRRX1 a été associée à des modifications de la signalisation stromale et à des phénotypes invasifs, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la dynamique du microenvironnement tumoral, des voies liées à la fibrose et de la progression métastatique. En tant que régulateur nucléaire, PRX1 est fréquemment utilisé comme marqueur et comme nœud mécanistique dans le traçage de lignées et la cartographie de circuits transcriptionnels dans des états cellulaires mésenchymateux et de type cellule souche.

PRX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PRRX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PRX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PRRX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PRRX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PRX1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PRRX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PRX1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PRX1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PRRX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.