PRX III CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401730-ACT

PRDX3 kodiert das menschliche Peroxiredoxin III (PRX III), eine in den Mitochondrien lokalisierte, thioredoxinabhängige Peroxidase, die Wasserstoffperoxid und Lipidhydroperoxide entgiftet und so die Redoxhomöostase aufrechterhält. Indem PRX III mitochondriale reaktive Sauerstoffspezies begrenzt, unterstützt es die oxidative Phosphorylierung, bewahrt die Integrität der mitochondrialen Membran und beeinflusst redoxsensitive Signalwege, die Stoffwechsel, Apoptose und Entzündungsreaktionen modulieren. Veränderungen der PRDX3-Expression oder -Aktivität werden häufig im Kontext der Oxidativstress-Biologie, mitochondrialer Dysfunktion und redoxabhängiger Anpassungen untersucht, wie sie mit Mechanismen bei Krebs, Neurodegeneration und kardiometabolischen Erkrankungen verbunden sind. Als zentraler Bestandteil des mitochondrialen antioxidativen Netzwerks wird PRX III häufig genutzt, um ROS-getriebene Veränderungen der Genexpression, der Bioenergetik und von Stressantwort-Signalwegen zu untersuchen.

PRX III Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PRDX3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PRX III Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PRDX3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PRDX3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PRX III-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PRDX3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PRX III-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PRX III-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PRDX3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.