PRP8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402819-ACT

PRPF8は、U2型スプライソソームに含まれるU5小核リボヌクレオタンパク質（snRNP）の高度に保存された中核構成要素であるPRP8をコードしており、pre-mRNAスプライシングにおいて触媒中心の形成やエクソン連結の協調に寄与する。スプライソソームRNAおよびタンパク質との広範な相互作用を通じて、PRP8はスプライス部位の認識、スプライソソーム組み立ての動態、ならびに多様な遺伝子プログラムにわたるトランスクリプトームの完全性を支えている。PRPF8機能が撹乱されると選択的スプライシングのパターンが乱れ、RNAプロセシングの広範な変化と、それに続く細胞周期制御、DNA損傷応答、プロテオスタシスに関連する下流経路の変調を引き起こし得る。PRPF8が関与する異常なスプライソソーム活性は遺伝性網膜疾患と関連づけられており、また悪性腫瘍など、RNAプロセシングの変化を特徴とする疾患で観察されるスプライソソーム制御異常の文脈でも研究されている。

PRP8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PRPF8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PRP8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PRPF8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPRPF8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PRP8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPRPF8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPRP8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPRPF8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPRP8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。