protein 4.2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406824

Visão geral

O EPB42 codifica a proteína 4.2 da membrana eritrocitária, um adaptador do citoesqueleto que estabiliza a membrana dos glóbulos vermelhos ao acoplar o complexo da banda 3 (SLC4A1) às redes juncionais de espectrina–actina. A proteína 4.2 sustenta a coesão da membrana, o formato bicôncavo da célula e a resiliência mecânica durante a passagem pela microvasculatura, integrando-se a vias que regulam a organização da membrana e a homeostase do transporte iônico. A disrupção de EPB42 compromete a integridade da membrana eritrocitária e está associada a fenótipos de fragilidade das hemácias observados em distúrbios hemolíticos hereditários, oferecendo um elo mecanístico entre a montagem do citoesqueleto e a fisiopatologia relacionada à hemólise. Por isso, este gene é amplamente usado para investigar interações membrana–citoesqueleto, a estequiometria de complexos proteicos e respostas ao estresse na biologia eritroide.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO protein 4.2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene EPB42 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do EPB42, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do EPB42 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína protein 4.2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de EPB42 para a investigação da sinalização de protein 4.2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) EPB42 críticos para a função protein 4.2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos EPB42 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo protein 4.2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo protein 4.2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus EPB42. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo protein 4.2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR protein 4.2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia EPB42 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo EPB42 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.