PROT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-408452

概要

SLC6A7は、SLC6ファミリーに属する血漿膜のナトリウム／塩化物依存性トランスポーターであるPROT（プロリン・トランスポーター）をコードしており、L-プロリンを高親和性で取り込む働きを担います。PROTは細胞内のプロリン利用可能量を制御することで、アミノ酸恒常性、レドックスバランス、さらにグルタミン酸サイクルやミトコンドリアのバイオエネルギーといった経路への代謝的カップリングに影響し得ます。とりわけプロリンの取り扱いが厳密に調節されている神経組織では、その影響が顕著です。プロリン輸送および代謝の変化は、神経伝達や細胞ストレス応答への影響を介して、神経発達および神経精神疾患関連の表現型と関連づけられています。そのためSLC6A7は、トランスポーター生物学、アミノ酸依存性シグナル伝達、ならびにプロリンフラックスと神経機能を結びつける機構の研究において重要な標的となります。

PROT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSLC6A7遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SLC6A7内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SLC6A7のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PROTタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PROTシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SLC6A7欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PROTの機能に不可欠なSLC6A7エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SLC6A7ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PROT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPROT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SLC6A7遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PROT HDRプラスミド（h）および PROT HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSLC6A7ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSLC6A7標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。