Profilin-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403456

Panoramica

PFN2 codifica la profilina-2, una proteina che si lega ai monomeri di actina e regola la dinamica della polimerizzazione dell’actina e il rimodellamento del citoscheletro. La profilina-2 modula l’assemblaggio dei filamenti in risposta alla segnalazione dei fosfoinositidi e a ligandi ricchi di prolina, coordinando processi quali la crescita dei neuriti, il traffico delle vescicole sinaptiche e la plasticità delle spine dipendente dall’attività. Attraverso il suo ruolo nell’organizzazione delle reti di actina, PFN2 contribuisce a vie che regolano i cambiamenti della forma cellulare, la dinamica di membrana e i comportamenti legati alla migrazione. Alterazioni della funzione della profilina-2 e del controllo citoscheletrico a valle sono state studiate nel contesto della connettività neuronale e di fenotipi neuroevolutivi o neurodegenerativi in cui l’omeostasi dell’actina risulta compromessa.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Profilin-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PFN2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PFN2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PFN2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Profilin-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PFN2 per lo studio della segnalazione di Profilin-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PFN2 critici per la funzione di Profilin-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PFN2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Profilin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Profilin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PFN2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Profilin-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Profilin-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PFN2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PFN2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.