Profilin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403456

概要

PFN2は、アクチン単量体結合タンパク質であるプロフィリン2をコードしており、アクチン重合のダイナミクスと細胞骨格の再編成を調節します。プロフィリン2は、ホスホイノシチドシグナルやプロリンリッチなリガンドに応答してフィラメント形成を調整し、神経突起の伸長、シナプス小胞輸送、活動依存的なスパイン可塑性などの過程を統合的に制御します。アクチンネットワークの組織化における役割を通じて、PFN2は細胞形態の変化、膜動態、移動に関連する挙動を司る経路に寄与します。プロフィリン2の機能変化と、それに伴う下流の細胞骨格制御は、アクチン恒常性が破綻する状況における神経回路の連結性や、神経発達性／神経変性の表現型との関連で研究されています。

Profilin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPFN2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PFN2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PFN2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Profilin-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Profilin-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PFN2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Profilin-2の機能に不可欠なPFN2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PFN2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Profilin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびProfilin-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PFN2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Profilin-2 HDRプラスミド（h）および Profilin-2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPFN2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPFN2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。