PRCC CRISPR Activation Plasmid (h): sc-407693-ACT

PRCC (papilläres Nierenzellkarzinom, translokationsassoziiert) kodiert ein nukleäres Protein, das über Interaktionen mit RNA‑Verarbeitungs- und Regulationskomplexen an der prä‑mRNA‑Spleißung und der transkriptionellen Kontrolle beteiligt ist. Es trägt zu zellulären Programmen bei, die die Genauigkeit der Genexpression, den Fortschritt des Zellzyklus und die Aufrechterhaltung der nukleären Architektur steuern. PRCC ist vor allem durch seine Beteiligung an chromosomalen Umlagerungen bekannt, die beim papillären Nierenzellkarzinom beobachtet werden; eine veränderte, PRCC‑assoziierte Regulation kann dabei nachgeschaltete transkriptionelle Netzwerke stören. Als Forschungsziel unterstützt PRCC Studien zu spleißosomengekoppelten Mechanismen, onkogener transkriptioneller Fehlregulation sowie kontextabhängigen Effekten auf Proliferations- und Stressantwort‑Signalwege.

PRCC Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PRCC-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PRCC Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PRCC-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PRCC-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PRCC-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PRCC-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PRCC-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PRCC-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PRCC-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.