PRAMEF6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-417298

概要

PRAMEF6（preferentially expressed antigen in melanoma family member 6）は、霊長類に特異的なPRAMEファミリータンパク質で、正常組織での発現が高度に限定されている一方、がんでしばしば脱抑制されて発現することが知られており、がん／精巣抗原（cancer/testis antigen）の生物学的特徴と一致します。PRAMEF6はPRAMEに比べて機能解析が進んでいないものの、PRAMEファミリータンパク質は転写およびエピジェネティック制御に関与するとされ、レチノイン酸受容体シグナル伝達や細胞分化プログラムの調節との関連が報告されています。PRAMEファミリー遺伝子の発現異常は、腫瘍細胞の増殖、免疫認識、系譜（リネージ）アイデンティティと関連しており、PRAMEF6は腫瘍性の転写状態を研究するための有用なマーカーであり、機序解明の標的にもなり得ます。研究用途としては、PRAMEF6依存的な遺伝子発現ネットワークのプロファイリングや、悪性環境下での異常活性化を可能にする制御機構の検証などが挙げられます。

PRAMEF6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPRAMEF6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PRAMEF6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PRAMEF6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PRAMEF6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PRAMEF6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PRAMEF6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PRAMEF6の機能に不可欠なPRAMEF6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PRAMEF6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PRAMEF6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPRAMEF6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PRAMEF6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PRAMEF6 HDRプラスミド（h）および PRAMEF6 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPRAMEF6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPRAMEF6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。