PPPDE1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-412095

Descripción general

PPPDE1 (también denominado en algunos contextos DESI2) codifica una proteína conservada de tipo desubiquitinasa/peptidasa, implicada en la regulación posraduccional de la estabilidad proteica y de la señalización mediante la modificación de conjugados tipo ubiquitina. Al influir en la proteostasis y en el recambio de proteínas reguladoras clave, PPPDE1 puede afectar procesos celulares como las respuestas al estrés, el control del ciclo celular y vías relacionadas con el control de calidad de proteínas de membrana y citosólicas. Se han descrito alteraciones en la expresión de PPPDE1 y desregulación de la señalización dependiente de ubiquitina en contextos relevantes para el cáncer y la inflamación, lo que respalda su utilidad como un nodo para estudios mecanísticos de la señalización oncogénica y la homeostasis celular. Investigar la pérdida de función de PPPDE1 puede ayudar a definir dependencias de vías y sustratos aguas abajo en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PPPDE1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DESI2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DESI2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DESI2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PPPDE1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DESI2 para la investigación de la señalización de PPPDE1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DESI2 críticos para la función de PPPDE1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DESI2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PPPDE1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PPPDE1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DESI2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PPPDE1 (h) y el plásmido HDR PPPDE1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DESI2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DESI2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.