PPP1R6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406901

概要

PPP1R3Dは、糖原（グリコーゲン）標的化アダプターとして働く制御サブユニットPPP1R6をコードしており、タンパク質ホスファターゼ1（PP1）を炭水化物の貯蔵やエネルギー恒常性に関与する基質へと誘導します。PP1の局在や触媒反応へのアクセス性を調節することで、PPP1R6はグリコーゲン代謝酵素のリン酸化状態に影響を与え、その結果としてヒト細胞におけるグリコーゲンの合成および動員を左右し得ます。この調節ノードは、代謝フラックス、細胞の増殖条件、ストレス応答を協調させる栄養感知機構やキナーゼ／ホスファターゼのシグナル伝達ネットワークと交差しています。グリコーゲン制御の破綻やホスファターゼシグナルの異常は、代謝性疾患や増殖性病態で繰り返し見られる特徴であり、そのためPPP1R6は、疾患関連の文脈におけるリン酸化制御機構を解明する研究の有用な足がかりとなります。

PPP1R6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPPP1R3D遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PPP1R3D内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PPP1R3Dのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PPP1R6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PPP1R6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PPP1R3D欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PPP1R6の機能に不可欠なPPP1R3Dエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PPP1R3Dゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PPP1R6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPPP1R6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PPP1R3D遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PPP1R6 HDRプラスミド（h）および PPP1R6 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPPP1R3Dホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPPP1R3D標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。