Particules Lentivirales d'Activation (h) PPARα: sc-400238-LAC

PPARA code le récepteur activé par les proliférateurs de peroxysomes alpha (PPARα), un récepteur nucléaire activé par des ligands qui régule des programmes transcriptionnels contrôlant la captation des lipides, la β‑oxydation mitochondriale et peroxysomale, ainsi que la cétogenèse. PPARα fonctionne en hétérodimère avec RXR et se fixe sur des éléments de réponse PPAR afin de coordonner l’adaptation métabolique lors du jeûne et d’un flux élevé d’acides gras, en intégrant des signaux provenant des acides gras et des eicosanoïdes. Il interagit avec des voies impliquées dans le métabolisme des lipoprotéines, l’homéostasie des acides biliaires et l’expression de gènes inflammatoires via un dialogue croisé avec NF‑κB et d’autres régulateurs transcriptionnels. Une signalisation PPARα dérégulée a été impliquée dans des états de dysfonction métabolique, notamment la dyslipidémie et des phénotypes de stéatose hépatique, et est fréquemment étudiée dans le contexte des réponses au stress cardiométabolique.

Les particules d'activation lentivirales PPARα (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PPARA dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PPARα (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PPARA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PPARα. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PPARA ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.