Plásmido CRISPR de Activación (h) PP5: sc-405979-ACT

PPP5C codifica la fosfatasa serina/treonina 5 (PP5), una fosfatasa con dominio TPR que integra señales mediante su asociación con complejos chaperona de HSP90 y múltiples proteínas cliente. PP5 regula el control dependiente de la fosforilación de las respuestas al estrés, la progresión del ciclo celular y la señalización ante daño del ADN, incluida la modulación de vías vinculadas a la señalización ATM/ATR y a redes MAPK. Mediante la desfosforilación de reguladores clave, PPP5C influye en la función del receptor de glucocorticoides, el control de checkpoints y la proteostasis, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar la fidelidad de la transducción de señales. La actividad o expresión desregulada de PPP5C se ha asociado con fenotipos de proliferación alterada y tolerancia al estrés, descritos en contextos de cáncer y neurobiología, lo que respalda su relevancia en modelos mecanísticos de enfermedad.

PP5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PPP5C sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PP5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PPP5C en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PPP5C, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PP5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PPP5C y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PP5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PP5 en células tumorales con expresión de PPP5C silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.