PP2B-Aβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422384

概要

Ppp3cb は、カルシニューリン（PP2B-Aβ）のマウス触媒サブユニットβをコードする。カルシニューリンは Ca2+/カルモジュリン依存性のセリン／スレオニン脱リン酸化酵素であり、カルシウムシグナルを、多数の基質にわたるリン酸化状態の変化へと変換する。PP2B-Aβ はカルシウム依存性シグナル伝達の中枢ノードで、NFAT ファミリー転写因子を顕著に制御し、神経の興奮性、シナプス可塑性、活動依存的な遺伝子発現に関連するプログラムを形作る。協調的な脱リン酸化を介して、カルシニューリンは細胞骨格リモデリング、小胞輸送、ストレス応答性シグナル伝達カスケードにも影響を及ぼす。カルシニューリン活性や PPP3CB 関連シグナルの制御破綻は、神経発達および神経精神疾患様の表現型に関与することが示唆されており、さらに異常なカルシウムシグナルが疾患関連の細胞状態に寄与するより広い文脈でも関連が指摘されている。

PP2B-Aβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPpp3cb遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ppp3cb内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ppp3cbのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PP2B-Aβタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PP2B-Aβシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ppp3cb欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PP2B-Aβの機能に不可欠なPpp3cbエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ppp3cbゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PP2B-Aβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPP2B-Aβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ppp3cb遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PP2B-Aβ HDRプラスミド（m）および PP2B-Aβ HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPpp3cbホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPpp3cb標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。