PP2A-Cβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400937

概要

PPP2CBは、主要なセリン／スレオニン脱リン酸化酵素であるプロテインホスファターゼ2A（PP2A）の触媒βサブユニット（PP2A-Cβ）をコードしています。PP2Aは多様な調節性Bサブユニットとヘテロ三量体のPP2Aホロ酵素を形成し、基質特異性や細胞内局在を制御します。PP2A-Cβは、細胞周期進行、DNA損傷応答、ストレスシグナル伝達を司る経路（AKT/MAPKや複数の有糸分裂制御因子を含む）の重要な結節点を脱リン酸化することで、キナーゼシグナルに拮抗します。これらの作用を通じてPP2Aは、転写プログラム、細胞骨格ダイナミクス、代謝制御に影響するリン酸化恒常性の維持に寄与します。PP2Aシグナルの破綻やPPP2CBの発現・制御の変化は、異常な増殖および生存シグナルと関連づけられており、腫瘍学や、ホスファターゼ依存的シグナルネットワークを扱う神経生物学分野の研究においても重要性が示されています。

PP2A-Cβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPPP2CB遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PPP2CB内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PPP2CBのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PP2A-Cβタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PP2A-Cβシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PPP2CB欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PP2A-Cβの機能に不可欠なPPP2CBエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PPP2CBゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PP2A-Cβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPP2A-Cβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PPP2CB遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PP2A-Cβ HDRプラスミド（h）および PP2A-Cβ HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPPP2CBホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPPP2CB標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。