POMC Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400592

Descripción general

POMC (proopiomelanocortina) codifica una prohormona secretora que se procesa proteolíticamente en múltiples péptidos bioactivos, incluidos la ACTH y las hormonas estimulantes de melanocitos, que coordinan la señalización endocrina del estrés, la homeostasis energética, la pigmentación y la nocicepción. En los corticotrofos hipofisarios, la ACTH derivada de POMC impulsa la esteroidogénesis suprarrenal a través de vías del receptor de melanocortina, vinculando la actividad del eje hipotálamo‑hipófisis‑suprarrenal con respuestas metabólicas e inmunitarias sistémicas. El procesamiento de POMC depende del tráfico de la vía secretora regulada y de las convertasas de prohormonas, integrándose con la señalización cAMP/PKA y programas de diferenciación neuroendocrina. La desregulación o pérdida de la función de POMC se asocia con trastornos de la función suprarrenal, fenotipos de obesidad e hiperfagia y alteraciones de la señalización melanocortinérgica relevantes para la investigación neuroendocrina y metabólica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO POMC (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen POMC en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del POMC junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de POMC tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína POMC.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en POMC para la investigación de la señalización de POMC, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de POMC críticos para la función de POMC
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de POMC para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido POMC CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido POMC CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus POMC. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR POMC (h) y el plásmido HDR POMC (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología POMC para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana POMC definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.