Pol III RPC32 Lentiviral Activation Particles (h): sc-417072-LAC

POLR3G kodiert Pol III RPC32, eine zentrale Untereinheit der RNA-Polymerase III, die die Transkription kleiner nichtkodierender RNAs unterstützt, darunter tRNAs, 5S-rRNA und weitere regulatorische RNAs, die für die Translationskapazität, Zellwachstum und Proteostase essenziell sind. RPC32 trägt zum Zusammenbau des Pol-III-Komplexes und zur promotorabhängigen Initiation bei und ist in Signalwege eingebunden, die Nährstoffsensorik und proliferative Signale mit der biosynthetischen Leistung koppeln. Veränderte Pol-III-Aktivität und eine dysregulierte Produktion kleiner RNAs werden häufig im Kontext onkogener Transformation, zellulärer Stressantworten und angeborener Immun-Signalwege untersucht, die durch zytosolische RNA-Spezies ausgelöst werden. POLR3G bietet daher einen mechanistischen Ansatzpunkt, um die transkriptionelle Kontrolle der Biogenese nichtkodierender RNAs und deren Einfluss auf zelluläre Zustandsentscheidungen zu untersuchen.

Pol III RPC32 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente POLR3G-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Pol III RPC32 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der POLR3G-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Pol III RPC32-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen POLR3G-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.