Pol I/II/III RPB8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406520

Übersicht

POLR2H kodiert RPB8, eine kleine, konservierte Unterheit, die von den RNA-Polymerasen I, II und III gemeinsam genutzt wird und zur Assemblierung, Stabilität und transkriptionellen Kompetenz der Polymerase beiträgt. Durch seine Beteiligung an der rRNA-Synthese (Pol I), der mRNA-Transkription (Pol II) sowie der Produktion von tRNA/5S-rRNA (Pol III) unterstützt RPB8 zentrale Genexpressionsprogramme, die Transkription mit Ribosomenbiogenese, Zellzyklus-Kontrolle und Proteostase koppeln. Eine veränderte Aktivität der basalen Transkriptionsmaschinerie und nukleolärer Stresssignalwege kann die globale Transkriptionsleistung und nachgeschaltete Signalgebung umformen, was POLR2H zu einem nützlichen Knotenpunkt macht, um Transkriptionsverwundbarkeiten und eine genomweite Neuprogrammierung der Genexpression in krankheitsrelevanten Kontexten zu untersuchen. Seine essenzielle, polymeraseübergreifende Rolle bietet zudem einen mechanistischen Ansatzpunkt, um zu erforschen, wie allgemeine Transkriptionsfaktoren und Chromatinzustände über verschiedene Polymerase-Systeme hinweg koordiniert werden.

Das Pol I/II/III RPB8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des POLR2H-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des POLR2H-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von POLR2H nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Pol I/II/III RPB8-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von POLR2H-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Pol I/II/III RPB8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf POLR2H-Exone abzielen, die für die Pol I/II/III RPB8-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere POLR2H-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Pol I/II/III RPB8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Pol I/II/III RPB8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des POLR2H-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Pol I/II/III RPB8 HDR-Plasmid (h) und Pol I/II/III RPB8 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von POLR2H-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten POLR2H-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.