Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Pol I/II/III RPB8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406520
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Pol I/II/III RPB8 CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド（h）は、GeCKO v2ライブラリ由来の配列を用いて最大のノックアウト効率を実現するよう設計された、Cas9ヌクレアーゼおよび標的特異的な20塩基対のガイドRNA（gRNA）をそれぞれコードするプラスミドのプールです
- gRNA配列は、Cas9を誘導してPol I/II/III RPB8ゲノム座において部位特異的な二本鎖切断（DSBs）を引き起こし、非相同末端結合（NHEJ）を介して遺伝子ノックアウトをもたらします
- ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子はLoxP部位で挟まれているため、安定したノックアウト細胞株を樹立した後、Creリコンビナーゼ（Creベクター：sc-418923）を用いて選択マーカーを除去することができる。
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Pol I/II/III RPB8 抗体 (B-2): sc-398512
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Pol I/II/III RPB8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h) | sc-406520 | 20 µg | $397.00 |
概要
POLR2Hは、RNAポリメラーゼI、II、IIIに共通する小型で保存性の高いサブユニットであるRPB8をコードしており、ポリメラーゼ複合体の組み立て、安定性、ならびに転写能の維持に寄与する。RPB8は、rRNA合成（Pol I）、mRNA転写（Pol II）、tRNAおよび5S rRNA産生（Pol III）に関与することで、転写とリボソーム生合成、細胞周期制御、プロテオスタシスを結び付ける中核的な遺伝子発現プログラムを支えている。基礎転写装置の活性変化や核小体ストレス経路の変動は、全体的な転写産物量や下流シグナル伝達を再構成し得るため、POLR2Hは、疾患に関連する文脈における転写の脆弱性やゲノムワイドな発現ネットワークの組み替えを研究するうえで有用な結節点となる。また、複数のポリメラーゼにまたがって必須の役割を担うことから、一般転写因子とクロマチン状態がポリメラーゼ系間でどのように協調するかを機構的に検証するための手掛かりも提供する。
Pol I/II/III RPB8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPOLR2H遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、POLR2H内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。
このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、POLR2Hのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Pol I/II/III RPB8タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。
このCRISPRノックアウトシステムにより、Pol I/II/III RPB8シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、POLR2H欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。
主な特徴
- Pol I/II/III RPB8の機能に不可欠なPOLR2Hエクソンを標的とするsgRNA
導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
ノックアウト効率を向上させるための、POLR2Hゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
トランスフェクションによる導入に対応
設計バリエーション
CRISPRs +/- HDR
- Pol I/II/III RPB8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPol I/II/III RPB8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、POLR2H遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
Pol I/II/III RPB8 HDRプラスミド（h）および Pol I/II/III RPB8 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPOLR2Hホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPOLR2H標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。