PNUTS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424580
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PNUTS O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico PNUTS, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PNUTS Anticorpo (F-8): sc-271681
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PNUTS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-424580 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O gene **Ppp1r10** em camundongo codifica a **PNUTS** (*protein phosphatase 1 regulatory subunit 10*), uma plataforma nuclear que direciona a **PP1** para a cromatina e para complexos associados a RNA, a fim de coordenar o controlo da expressão génica dependente de fosforilação. A PNUTS participa na regulação transcricional, na sinalização da resposta a danos no DNA e no controlo de checkpoints do ciclo celular, influenciando processos como a gestão do stress replicativo e a manutenção da estabilidade do genoma. Por meio de interações com fatores envolvidos na organização da cromatina e no processamento de RNA, a PNUTS ajuda a acoplar a dinâmica de fosforilação ao alongamento transcricional e à biogénese de RNA. A desregulação da sinalização **PP1–PNUTS** tem sido associada a programas proliferativos alterados e a fenótipos de instabilidade genómica relevantes para estudos mecanísticos de vias associadas ao cancro e à neurobiologia.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PNUTS (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ppp1r10 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ppp1r10, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ppp1r10 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PNUTS.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ppp1r10 para a investigação da sinalização de PNUTS, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ppp1r10 críticos para a função PNUTS
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ppp1r10 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo PNUTS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PNUTS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ppp1r10. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo PNUTS Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PNUTS (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ppp1r10 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ppp1r10 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.