Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PNP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404914
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PNP O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico PNP, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PNP Anticorpo (F-10): sc-365551
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PNP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404914 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
A fosforilase de nucleosídeos de purina (PNP) é uma enzima citosólica da via de salvamento de purinas que catalisa a fosforólise dos nucleosídeos inosina e guanosina para gerar hipoxantina ou guanina, apoiando assim a homeostase e a reciclagem de nucleotídeos. Ao controlar o equilíbrio de metabólitos de purina, a PNP influencia o estado energético celular, as condições redox e a disponibilidade de precursores de DNA/RNA, com impactos a jusante na proliferação e nas respostas ao estresse. A atividade da PNP é particularmente importante no metabolismo de células imunes, em que o fluxo de purinas modula a sobrevivência e a função de linfócitos. A desregulação ou deficiência hereditária de PNP está associada a fenótipos de imunodeficiência e ao acúmulo alterado de metabólitos de purina, tornando-a um alvo relevante para estudos mecanísticos sobre decisões de destino celular ligadas ao metabolismo.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PNP (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PNP em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PNP, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PNP na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PNP.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PNP para a investigação da sinalização de PNP, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PNP críticos para a função PNP
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PNP para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo PNP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PNP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PNP. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo PNP Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PNP (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PNP para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PNP definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.