Plásmido Doble Nickase (h) PMS2: sc-401600-NIC

PMS2 codifica un componente central de la maquinaria de reparación de errores de apareamiento del ADN (MMR), formando el heterodímero MutLα con MLH1 para coordinar el reconocimiento y el procesamiento de desajustes base–base y bucles de inserción–deleción que surgen durante la replicación. Mediante cambios conformacionales impulsados por su actividad ATPasa y su actividad endonucleasa, PMS2 ayuda a acoplar la detección del desajuste con la escisión, la resíntesis y la ligación, manteniendo así la estabilidad del genoma y limitando la mutagénesis. La función de PMS2 se interrelaciona con la fidelidad de la replicación, la señalización de puntos de control y las respuestas celulares al daño del ADN. La alteración o desregulación de PMS2 se asocia con un aumento de la inestabilidad de microsatélites y fenotipos de hipermutación, relevantes para estudios de predisposición hereditaria al cáncer y de mecanismos de enfermedad vinculados a la reparación del ADN.

PMS2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PMS2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PMS2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PMS2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PMS2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.