Plásmido CRISPR de Activación (h) PMS1: sc-418473-ACT

El gen humano **PMS1** codifica un homólogo de MutL que participa en la reparación de desajustes del ADN, apoyando la fidelidad de la replicación al coordinar el reconocimiento y el procesamiento de desajustes base–base y de bucles de inserción–deleción. PMS1 funciona dentro de la red de complejos MutL para acoplar el reconocimiento del desajuste con la escisión y la resíntesis posteriores, contribuyendo a la estabilidad del genoma y a la supresión de la mutagénesis espontánea. Los defectos o la regulación alterada de los genes de reparación de desajustes pueden elevar la inestabilidad de microsatélites y aumentar la acumulación de mutaciones, procesos de amplia relevancia para la carcinogénesis y las respuestas celulares al estrés. Por ello, PMS1 se estudia en vías que gobiernan la señalización del daño en el ADN, la reparación asociada a la replicación y el mantenimiento de la integridad cromosómica.

PMS1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PMS1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PMS1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PMS1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PMS1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PMS1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PMS1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PMS1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PMS1 en células tumorales con expresión de PMS1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.