PMPCB Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405207

Visão geral

PMPCB codifica a subunidade beta da peptidase de processamento mitocondrial, um componente central do complexo MPP heterodimérico que cliva as pré-sequências de direcionamento N-terminais de proteínas codificadas no núcleo após a importação para a matriz mitocondrial. Ao permitir a maturação de enzimas da fosforilação oxidativa e do metabolismo, a PMPCB sustenta a proteostase mitocondrial, a homeostase bioenergética e respostas ao estresse associadas ao controle de qualidade mitocondrial. A perturbação do processamento de pré-sequências mitocondriais pode comprometer a função da cadeia respiratória, aumentar o estresse proteotóxico e alterar a sinalização de apoptose e mitofagia. Disfunções de PMPCB e o processamento mitocondrial de proteínas alterado têm sido associados a fenótipos do neurodesenvolvimento e a mecanismos de doenças mitocondriais, tornando-a relevante para estudos de metabolismo energético e disfunção de organelas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PMPCB (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PMPCB em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PMPCB, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PMPCB na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PMPCB.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PMPCB para a investigação da sinalização de PMPCB, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PMPCB críticos para a função PMPCB
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PMPCB para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PMPCB Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PMPCB Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PMPCB. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PMPCB Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PMPCB (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PMPCB para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PMPCB definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.