PLZF CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400354-ACT

ZBTB16 kodiert PLZF, einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor mit BTB/POZ-Domäne, der Zellschicksalsentscheidungen steuert, indem er chromatinassoziierte Programme der Transkriptionsrepression und -aktivierung koordiniert. In der menschlichen Hämatopoese und Immunentwicklung trägt PLZF zur Regulation der Aufrechterhaltung von Vorläuferzellen und der Festlegung von Zelllinien bei, einschließlich Effekten auf die Differenzierung angeboren-ähnlicher Lymphozyten und die Zytokin-abhängige Genexpression. PLZF-abhängige Netzwerke überschneiden sich mit der epigenetischen Kontrolle von Proliferation und Differenzierung und verknüpfen diesen Faktor mit entwicklungsbiologischer Regulation sowie Signalwegen der zellulären Reifung. Eine dysregulierte ZBTB16/PLZF-Expression oder genomische Umlagerungen wurden in hämatologischen Krankheitskontexten mit veränderten Transkriptionsprogrammen in Verbindung gebracht, was ZBTB16/PLZF zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung transkriptionsfaktorgetriebener Phänotypen macht.

PLZF Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZBTB16-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PLZF Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZBTB16-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZBTB16-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PLZF-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZBTB16-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PLZF-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PLZF-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZBTB16-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.