PLP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401663-ACT

PLP1は、プロテオリピドタンパク質1（PLP）をコードしており、PLPは中枢神経系における緻密ミエリンの主要な構造要素です。PLPはオリゴデンドロサイトの膜構造を支え、効率的な軸索伝導に寄与します。PLPは脂質に富む膜の組織化や、白質の健全性を規定するミエリン形成（ミエリン生合成）経路を介して、ミエリン鞘の組み立てと維持に関与します。PLP1のコピー数（用量）や配列の変化は、ミエリン形成とオリゴデンドロサイト機能を障害し、遺伝性の低髄鞘化白質ジストロフィーや、それに関連する神経発達・神経変性の表現型と関連します。そのためPLP1は、オリゴデンドロサイト分化、軸索—グリア相互作用、ミエリン安定性の機構を扱うモデルで頻繁に研究されています。

PLP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PLP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PLP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PLP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPLP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PLPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPLP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPLP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPLP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPLP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。