Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (m) Plk: sc-422309-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Plk correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Plk Double Nickase (m) et le plasmide Plk Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Plk1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Plk Antibody (F-8): sc-17783
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Plk | sc-422309-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) Plk | sc-422309-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Plk1** code la kinase de type Polo 1 (Plk), une kinase sérine/thréonine qui coordonne des transitions clés au cours de la mitose en régulant la maturation des centrosomes, l’assemblage du fuseau bipolaire, la ségrégation des chromosomes et la cytocinèse. L’activité de Plk1 s’intègre à la signalisation CDK1–cycline B et contrôle de multiples substrats mitotiques, notamment des protéines impliquées dans la fonction du kinétochore et la dynamique des microtubules, afin d’assurer une progression fidèle du cycle cellulaire. Une expression ou une activité dérégulée de Plk1 est associée à une prolifération aberrante et à une instabilité du génome, ce qui en fait une cible fréquemment utilisée pour étudier les points de contrôle mitotiques, l’instabilité chromosomique et les décisions de destinée cellulaire dans les cellules de mammifères en division.
Plk Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Plk1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Plk1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Plk1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Plk1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.