Plasmide Double Nickase (h) plexin-B1: sc-401840-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) plexin-B1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide plexin-B1 Double Nickase (h) et le plasmide plexin-B1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PLXNB1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: plexin-B1 Antibody (A-8): sc-28372
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) plexin-B1 | sc-401840-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **PLXNB1** code la plexine-B1, un récepteur transmembranaire des sémaphorines de classe 4 qui régule le remodelage du cytosquelette, l’adhésion cellulaire et la migration directionnelle via la signalisation des GTPases de la famille Rho et des interactions fonctionnelles avec des récepteurs à activité tyrosine kinase tels que MET et ERBB2. La signalisation médiée par la plexine-B1 influence le guidage axonal et l’organisation des réseaux neuronaux, ainsi que le comportement des cellules vasculaires et épithéliales, par l’intermédiaire de voies contrôlant la dynamique de l’actine et le renouvellement des adhésions focales. Une activité dérégulée de **PLXNB1** a été associée à des phénotypes invasifs altérés et à une organisation tissulaire aberrante dans des contextes de recherche en oncologie et en neurodéveloppement, ce qui en fait un nœud utile pour étudier les réseaux de signalisation dépendants des sémaphorines.
plexin-B1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PLXNB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PLXNB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PLXNB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PLXNB1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.