Plasmide CRISPR d'Activation (h) plexin-B1: sc-401840-ACT

PLXNB1 code la plexine‑B1, un récepteur transmembranaire des sémaphorines de classe 4 qui coordonne une signalisation dépendante du contact afin de réguler le remodelage du cytosquelette, la migration cellulaire directionnelle et le guidage axonal. La plexine‑B1 intègre des signaux via les GTPases de la famille Rho et leurs effecteurs associés, influençant la dynamique de l’actine, le renouvellement des adhérences et les programmes de polarité cellulaire, avec des répercussions en aval sur la mise en place des tissus et l’organisation des barrières. En biologie humaine, des altérations de l’expression ou de la signalisation de PLXNB1 ont été associées à une motilité dérégulée et à un comportement invasif dans des modèles de cancer, ainsi qu’à des processus neurodéveloppementaux où les voies sémaphorine–plexine façonnent la connectivité neuronale. Ces caractéristiques font de la plexine‑B1 un nœud utile pour étudier la signalisation des sémaphorines, le remodelage lié à Rho/ROCK et les changements contextuels des interactions cellule‑cellule et cellule‑matrice.

plexin-B1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PLXNB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

plexin-B1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PLXNB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PLXNB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de plexin-B1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PLXNB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de plexin-B1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie plexin-B1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PLXNB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.