plexin-A3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422320

概要

Plxna3は、クラス3セマフォリンの膜貫通受容体であるプレキシンA3をコードしており、セマフォリン–ニューロピリン–プレキシンシグナル伝達を介して、軸索ガイダンス、神経細胞の移動、樹状突起のパターニングを制御する。プレキシンA3は、RhoファミリーGTPアーゼおよび関連エフェクターを介してアクチン／微小管細胞骨格を再編成するシグナルを統合し、成長円錐の崩壊や方向性のある運動性に影響を与える。神経系以外でも、プレキシンA3は細胞接着や細胞運動の制御に関与することが示されており、これらは発生過程のパターニングや組織の構築に関わる重要なプロセスである。セマフォリン／プレキシン経路の制御異常は、神経発達異常や、疾患関連モデルにおける移動表現型の変化と関連づけられている。

plexin-A3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPlxna3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Plxna3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Plxna3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、plexin-A3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、plexin-A3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Plxna3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• plexin-A3の機能に不可欠なPlxna3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Plxna3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• plexin-A3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびplexin-A3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Plxna3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  plexin-A3 HDRプラスミド（m）および plexin-A3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPlxna3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPlxna3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。