PLEKHG4B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407381

概要

PLEKHG4Bは、プレクストリン相同（PH）ドメインおよびRhoGEF関連ドメインを含むRhoグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）様タンパク質をコードしており、これらのドメインはホスホイノシチドシグナル伝達と低分子GTPアーゼの制御を結び付ける役割に関与すると考えられています。RhoファミリーGTPアーゼ活性の調節を介して、PLEKHG4Bはアクチン細胞骨格ダイナミクス、膜輸送、ならびに接着や運動性に影響する細胞形態プログラムの制御と関連付けられています。発現パターンやネットワーク上の関連性から、PLEKHG4Bは、細胞骨格リモデリングが律速となる神経系および免疫関連の経路と交差する、より広範なシグナル伝達コンテキストの中に位置付けられます。Rho GTPアーゼシグナル伝達や細胞骨格依存的プロセスの破綻は、神経発達・神経変性の表現型や、がんモデルにおける浸潤性挙動と繰り返し関連して報告されており、機構解明研究においてPLEKHG4Bの機能を検証する動機となっています。

PLEKHG4B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPLEKHG4B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PLEKHG4B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PLEKHG4Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PLEKHG4Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PLEKHG4Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PLEKHG4B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PLEKHG4Bの機能に不可欠なPLEKHG4Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PLEKHG4Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PLEKHG4B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPLEKHG4B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PLEKHG4B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PLEKHG4B HDRプラスミド（h）および PLEKHG4B HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPLEKHG4Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPLEKHG4B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。