PLC β1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401141

概要

PLCB1は、ホスホリパーゼCβ1（PLCβ1）をコードしています。PLCβ1はGタンパク質によって制御されるエフェクター酵素で、ホスファチジルイノシトール4,5-ビスリン酸を加水分解してイノシトール1,4,5-三リン酸（IP3）とジアシルグリセロール（DAG）を生成し、これにより細胞内Ca2+の動員とプロテインキナーゼC（PKC）シグナル伝達の活性化を引き起こします。この経路はGPCRからの入力を統合し、神経細胞の興奮性、シナプスシグナル伝達、分泌、細胞骨格ダイナミクスなど多様なプロセスを制御します。PLCβ1活性は下流のMAPKおよびCa2+依存性の転写プログラムにも寄与し、膜受容体シグナルを遺伝子発現や細胞状態の変化へと結び付けます。PLCB1の発現やシグナル伝達の変化は、神経精神疾患様の表現型や増殖制御シグナルの異常と関連することが報告されており、シグナル伝達機構や疾患関連の細胞モデルを用いたメカニズム研究に有用です。

PLC β1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPLCB1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PLCB1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PLCB1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PLC β1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PLC β1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PLCB1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PLC β1の機能に不可欠なPLCB1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PLCB1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PLC β1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPLC β1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PLCB1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PLC β1 HDRプラスミド（h）および PLC β1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPLCB1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPLCB1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。