pki γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-411573

概要

PKIG は、cAMP 依存性プロテインキナーゼA（PKA）の内因性阻害因子であるプロテインキナーゼ阻害タンパク質ガンマ（PKIγ）をコードしており、基礎状態および刺激誘導性の PKA シグナル伝達を抑制するのに寄与します。PKIγ は PKA の触媒サブユニットに結合することで、GPCR―アデニリルシクラーゼ―cAMP 経路の下流における、転写、代謝、細胞周期進行、ならびに細胞骨格動態のリン酸化依存的な制御を調節します。PKIG の機能は、CREB によって制御される遺伝子発現や、細胞のストレス応答および分化プログラムを形作るより広範なキナーゼシグナル伝達ネットワークとも交差します。cAMP/PKA シグナル伝達の破綻は、腫瘍細胞の増殖、内分泌シグナルの異常、神経機能など、複数の疾患関連プロセスに関与すると示唆されており、そのため PKIG は機構研究に有用な解析ノードとなります。

pki γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPKIG遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PKIG内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PKIGのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、pki γタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、pki γシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PKIG欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• pki γの機能に不可欠なPKIGエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PKIGゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• pki γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびpki γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PKIG遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  pki γ HDRプラスミド（h）および pki γ HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPKIGホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPKIG標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。