PKC beta CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422259

概要

PrkcbはプロテインキナーゼCベータ（PKCβ）をコードしており、ジアシルグリセロールおよびCa2+に応答するセリン／スレオニンキナーゼである。PKCβは、受容体依存的なホスホリパーゼCシグナル伝達を、増殖・アポトーシス・分化を制御するリン酸化プログラムへと結び付ける。マウスの免疫細胞および造血系細胞では、PKCβはB細胞受容体（BCR）シグナル伝達の下流に位置する主要なエフェクターとして、NF-κBおよびMAPK経路の活性化、細胞骨格の再編成、ならびに小胞輸送を調節する。さらにPKCβは、接着、バリア機能、酸化ストレス経路の調節を介して、内皮細胞および平滑筋の応答も制御する。PKCβ活性の変化は、免疫シグナルの破綻や炎症過程の異常と関連付けられており、心代謝および血管表現型の機序研究における重要性を支持している。

PKC beta CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPrkcb遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Prkcb内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Prkcbのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PKC betaタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PKC betaシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Prkcb欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PKC betaの機能に不可欠なPrkcbエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Prkcbゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PKC beta CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPKC beta CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Prkcb遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PKC beta HDRプラスミド（m）および PKC beta HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPrkcbホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPrkcb標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。