PKC beta Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422259
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PKC beta O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico PKC beta, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PKC beta 1 Anticorpo (E-3): sc-8049
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PKC beta Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422259 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Prkcb codifica a proteína quinase C beta (PKCβ), uma quinase de serina/treonina responsiva a diacilglicerol e Ca2+ que conecta a sinalização da fosfolipase C dependente de receptor a programas de fosforilação que controlam proliferação, apoptose e diferenciação. Em células imunológicas e hematopoéticas de camundongo, a PKCβ é um efetor-chave a jusante da sinalização do receptor de células B, modulando a ativação das vias NF-κB e MAPK, a remodelação do citoesqueleto e o tráfego vesicular. A PKCβ também regula respostas endoteliais e do músculo liso por meio da modulação de vias de adesão, função de barreira e estresse oxidativo. Alterações na atividade da PKCβ têm sido associadas à desregulação da sinalização imune e a processos inflamatórios, reforçando sua relevância em estudos mecanísticos de fenótipos cardiometabólicos e vasculares.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PKC beta (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Prkcb em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Prkcb, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Prkcb na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PKC beta.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Prkcb para a investigação da sinalização de PKC beta, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Prkcb críticos para a função PKC beta
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Prkcb para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo PKC beta Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PKC beta Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Prkcb. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo PKC beta Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PKC beta (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Prkcb para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Prkcb definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.