PKA Iα reg CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422400

概要

Prkar1a は、cAMP 依存性プロテインキナーゼA（PKA）の I 型制御サブユニット α をコードしている。これは触媒サブユニットに結合して、cAMP によりホロ酵素が解離するまでキナーゼ活性を抑制する主要な負の制御因子である。PKA シグナル伝達の制御を通じて、PRKAR1A は、GPCR–アデニリルシクラーゼ–cAMP 経路の下流で生じる転写応答を含め、代謝、細胞周期進行、分化、転写応答を司るリン酸化プログラムに影響を与える。マウス系では、Prkar1a の攪乱により cAMP/PKA 経路のダイナミクスが変化し、CREB 制御下の遺伝子発現や、MAPK 関連過程を含むより広範なシグナル間クロストークに下流効果が及ぶ。PRKAR1A および cAMP/PKA シグナルの破綻は、内分泌や成長制御に関わる表現型と関連づけられており、in vivo および培養細胞におけるシグナル依存性疾患機序の研究において重要な標的となる。

PKA Iα reg CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPrkar1a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Prkar1a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Prkar1aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PKA Iα regタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PKA Iα regシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Prkar1a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PKA Iα regの機能に不可欠なPrkar1aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Prkar1aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PKA Iα reg CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPKA Iα reg CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Prkar1a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PKA Iα reg HDRプラスミド（m）および PKA Iα reg HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPrkar1aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPrkar1a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。