Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
PKAγ cat Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400874
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PKAγ cat O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico PKAγ cat, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PKAγ cat Anticorpo (A-4): sc-514087
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PKAγ cat Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400874 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
PRKACG codifica a subunidade catalítica gama da proteína quinase A dependente de cAMP (PKAγ), uma quinase de serina/treonina que fosforila diversos substratos para traduzir sinais de cAMP em respostas celulares. Por meio da regulação por subunidades regulatórias da PKA e por proteínas de ancoragem de A-quinase (AKAPs), a PKAγ ajuda a controlar a compartimentalização da sinalização e modula processos que incluem metabolismo, programas transcricionais, dinâmica do citoesqueleto e atividade de canais iônicos. Essa atividade quinase se cruza com a sinalização de GPCR–adenilil ciclase–cAMP e com vias a jusante, como a expressão gênica dependente de CREB e o “cross-talk” com redes de MAPK. A desregulação da sinalização cAMP/PKA está implicada em múltiplos fenótipos relevantes para doenças, incluindo sinalização proliferativa alterada, perturbações endócrinas e metabólicas e mudanças na excitabilidade neuronal, sustentando estudos mecanísticos da função de PRKACG em células humanas.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PKAγ cat (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PRKACG em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PRKACG, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PRKACG na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PKAγ cat.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PRKACG para a investigação da sinalização de PKAγ cat, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PRKACG críticos para a função PKAγ cat
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PRKACG para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo PKAγ cat Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PKAγ cat Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PRKACG. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo PKAγ cat Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PKAγ cat (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PRKACG para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PRKACG definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.