PKAγ cat CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400874

概要

PRKACGは、cAMP依存性プロテインキナーゼA（PKAγ）の触媒サブユニットγをコードする遺伝子であり、多様な基質をリン酸化するセリン／スレオニンキナーゼとして、cAMPシグナルを細胞応答へと変換します。PKAの調節サブユニットやAキナーゼアンカリングタンパク質（AKAP）による制御を介して、PKAγはシグナルの区画化（コンパートメント化）の制御に関与し、代謝、転写プログラム、細胞骨格ダイナミクス、イオンチャネル活性などの過程を調節します。このキナーゼ活性は、GPCR–アデニリルシクラーゼ–cAMPシグナル伝達および、CREB依存的遺伝子発現やMAPKネットワークとのクロストークといった下流経路と交差します。cAMP/PKAシグナルの破綻は、増殖シグナルの変化、内分泌・代謝の攪乱、神経興奮性の変化など、複数の疾患関連表現型に関与するとされており、ヒト細胞におけるPRKACG機能の機序解明研究を支持します。

PKAγ cat CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPRKACG遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PRKACG内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PRKACGのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PKAγ catタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PKAγ catシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PRKACG欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PKAγ catの機能に不可欠なPRKACGエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PRKACGゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PKAγ cat CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPKAγ cat CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PRKACG遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PKAγ cat HDRプラスミド（h）および PKAγ cat HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPRKACGホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPRKACG標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。