Plasmide Double Nickase (h) PIEZO1: sc-410555-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PIEZO1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PIEZO1 Double Nickase (h) et le plasmide PIEZO1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PIEZO1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PIEZO1 | sc-410555-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PIEZO1 | sc-410555-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PIEZO1 code un canal cationique non sélectif, mécanosensible, qui convertit la tension membranaire et les forces de cisaillement en un influx de Ca²⁺, permettant aux cellules de détecter et de répondre aux signaux mécaniques. L’activité de PIEZO1 régule notamment le contrôle du volume cellulaire, l’homéostasie ionique, le remodelage du cytosquelette et des voies de mécanotransduction qui influencent la migration, l’adhérence et la signalisation endothéliale. Dans les contextes hématologiques et vasculaires, la signalisation calcique médiée par PIEZO1 contribue à l’hydratation et à la déformabilité des globules rouges, ainsi qu’aux réponses des cellules endothéliales dépendantes du flux. Des perturbations génétiques et fonctionnelles de PIEZO1 ont été associées à des troubles de la physiologie érythrocytaire et du développement lymphatique/vasculaire, ce qui en fait une cible pertinente pour disséquer les réseaux de signalisation régulés par la mécanique.
PIEZO1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PIEZO1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PIEZO1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PIEZO1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PIEZO1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.