PIASy CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403125

概要

PIAS4は、タンパク質のSUMO化を調節するSUMO E3リガーゼであるPIASyをコードしており、転写プログラム、DNA損傷応答、自然免疫シグナル伝達を精緻に制御します。PIASyは多様な転写因子やシグナル伝達中間体の活性、局在、安定性を調節し、SUMO依存的な制御をNF-κB経路、インターフェロン応答、ストレス応答性ネットワークなどの経路と結び付けます。これらの機構を通じて、PIASyは細胞周期の進行、アポトーシス、ならびに疾患生物学においてしばしば破綻するクロマチン関連プロセスに影響を与えます。PIAS4/PIASy機能の変化は、がん遺伝子シグナル、炎症制御、腫瘍形成や細胞形質転換モデルに関連するゲノム維持表現型の文脈で研究されてきました。

PIASy CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPIAS4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PIAS4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PIAS4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PIASyタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PIASyシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PIAS4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PIASyの機能に不可欠なPIAS4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PIAS4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PIASy CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPIASy CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PIAS4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PIASy HDRプラスミド（h）および PIASy HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPIAS4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPIAS4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。