PI-9 Double Nickase Plasmid (m): sc-423120-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PI-9 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PI-9 Double-Nickase-Plasmid (m) und PI-9 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Serpinb9 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PI-9: sc-390501
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PI-9 Double Nickase Plasmid (m) | sc-423120-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PI-9 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-423120-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse-Serpinb9 kodiert PI-9, einen intrazellulären Serinprotease-Inhibitor, der in erster Linie die Aktivität von Granzyme B begrenzt und so zur Regulation der Effektorfunktionen zytotoxischer Lymphozyten beiträgt. Durch die Einschränkung proteasevermittelter Substratspaltung hilft PI-9, Apoptose sowie entzündliche Signalwege sowohl in immunprivilegierten als auch in immunaktivierten Kontexten zu kontrollieren. Die Expression von Serpinb9 steht im Zusammenhang mit antigenspezifischen Immunantworten, dem Überleben von Immunzellen und der Modulation von Zelltodprogrammen nach der Perforin/Granzyme-Vermittlung. Eine Fehlregulation der durch PI-9 vermittelten Proteasehemmung wurde mit veränderter Immuntoleranz und entzündlicher Pathologie in Verbindung gebracht, wodurch Serpinb9 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien in der Immunologie und zur Regulation von Zellschicksalsentscheidungen darstellt.
PI-9 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Serpinb9-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Serpinb9 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Serpinb9-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Serpinb9-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.