PI 3-kinase p110γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401043

概要

PIK3CGは、クラスIBホスホイノシチド3-キナーゼ（PI3K）の触媒サブユニットであるp110γをコードしており、造血系細胞をはじめとするさまざまな細胞種において、GPCR（Gタンパク質共役型受容体）駆動のホスホイノシチドシグナル伝達を仲介する主要因子です。PI3K p110γはホスファチジルイノシトール脂質をリン酸化してPIP3を産生し、PDK1、mTOR、小型GTPase制御因子などの下流エフェクターを介して、AKT依存的な生存プログラム、細胞骨格の再編成、ならびに指向性走化性を促進します。この経路は、ケモカイン受容体、補体系受容体、炎症性メディエーターからのシグナルを統合し、白血球の活性化、遊走、酸化バーストを制御します。PIK3CGシグナルの制御異常は、過剰または異常な炎症応答や免疫細胞機能不全に関与するとされ、腫瘍—免疫相互作用や微小環境シグナル伝達の観点からも研究されています。

PI 3-kinase p110γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPIK3CG遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PIK3CG内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PIK3CGのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PI 3-kinase p110γタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PI 3-kinase p110γシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PIK3CG欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PI 3-kinase p110γの機能に不可欠なPIK3CGエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PIK3CGゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PI 3-kinase p110γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPI 3-kinase p110γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PIK3CG遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PI 3-kinase p110γ HDRプラスミド（h）および PI 3-kinase p110γ HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPIK3CGホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPIK3CG標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。