Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PI 3-kinase p110β Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400541
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PI 3-kinase p110β Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PI 3-kinase p110β, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PI 3-kinase p110β Antibody (C-8): sc-376641
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PI 3-kinase p110β Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400541 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
PIK3CB codifica la subunità catalitica p110β della fosfoinositide 3-chinasi (PI3K) di classe I, che fosforila PIP2 per generare PIP3 e propagare i segnali a valle di AKT–mTOR e di altri nodi effettrici. La PI3K p110β svolge un ruolo di primo piano nella segnalazione avviata dai recettori tirosin-chinasici e dai GPCR, integrando stimoli che regolano proliferazione, sopravvivenza, metabolismo, dinamica del citoscheletro e traffico vescicolare. Nelle cellule umane, un’attività alterata della via PI3K è frequentemente associata a segnalazione oncogenica, meccanismi di resistenza alle terapie e risposte immunitarie e infiammatorie aberranti. La funzione di PIK3CB è rilevante anche per la segnalazione insulina/IGF e per i programmi di motilità cellulare, rendendolo un nodo ampiamente studiato nella mappatura delle vie di segnalazione e nella genomica funzionale.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PI 3-kinase p110β (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PIK3CB in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PIK3CB insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PIK3CB a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PI 3-kinase p110β.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PIK3CB per lo studio della segnalazione di PI 3-kinase p110β, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni PIK3CB critici per la funzione di PI 3-kinase p110β
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PIK3CB per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PI 3-kinase p110β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PI 3-kinase p110β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PIK3CB. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PI 3-kinase p110β Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PI 3-kinase p110β (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PIK3CB per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PIK3CB definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.