PI 3-kinase p100 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-432531

概要

Pik3c3は、クラスIIIホスファチジルイノシトール3-キナーゼの触媒サブユニット（PI 3-キナーゼp100／Vps34としても知られる）をコードしており、ホスファチジルイノシトール3-リン酸（PI3P）を産生して、エンドソーム膜の同一性や輸送（トラフィッキング）を制御します。マウス細胞では、このキナーゼによるPI3P産生はオートファジー開始、エンドソームからリソソームへの成熟、ならびにVPS15やBeclin 1などの制御因子との複合体を介した小胞輸送・選別の中核を担います。Pik3c3の活性は栄養状態やストレスのシグナルを統合し、リソソームの恒常性と細胞内品質管理を協調的に制御することで、プロテオスタシス、ミトコンドリアのターンオーバー、免疫シグナル伝達などの過程に影響します。Pik3c3機能に関連するエンドリソソーム系およびオートファジー経路の破綻は、神経変性、感染生物学、腫瘍細胞代謝といった文脈でしばしば研究されています。

PI 3-kinase p100 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPik3c3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pik3c3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pik3c3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PI 3-kinase p100タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PI 3-kinase p100シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pik3c3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PI 3-kinase p100の機能に不可欠なPik3c3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Pik3c3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PI 3-kinase p100 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPI 3-kinase p100 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pik3c3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PI 3-kinase p100 HDRプラスミド（m）および PI 3-kinase p100 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPik3c3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPik3c3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。