Plasmide CRISPR d'Activation (h) PI 3-kinase C2β: sc-402519-ACT

PIK3C2B code la phosphatidylinositol-4-phosphate 3-kinase C2β (PI3K-C2β), une kinase lipidique de classe II qui génère des signaux phosphoinositidiques importants pour la dynamique membranaire et le trafic intracellulaire. En régulant les pools de phosphatidylinositol 3-phosphate et de phosphatidylinositol (3,4)-bisphosphate, PI3K-C2β influence l’endocytose, le transport vésiculaire, le remodelage du cytosquelette et, selon le contexte, des sorties de signalisation liées à PI3K/AKT. Une expression ou une activité altérée de PIK3C2B a été associée à une dérégulation de la signalisation des facteurs de croissance et à des phénotypes invasifs dans plusieurs modèles expérimentaux de cancer, et le gène est étudié dans des voies liées au métabolisme et aux réponses au stress cellulaire. Ces caractéristiques font de PIK3C2B une cible utile pour disséquer le contrôle, par les phosphoinositides, de la signalisation et des processus associés aux membranes dans les cellules humaines.

PI 3-kinase C2β Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PIK3C2B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PI 3-kinase C2β Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PIK3C2B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PIK3C2B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PI 3-kinase C2β. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PIK3C2B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PI 3-kinase C2β au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PI 3-kinase C2β dans les cellules tumorales présentant une expression de PIK3C2B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.