PHF6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-427858

概要

マウスPhf6は、核内のPHD様亜鉛フィンガータンパク質であるPHF6をコードしており、クロマチンに結合する転写およびRNA生合成の制御因子として機能します。PHF6は、クロマチンリモデリング複合体やヒストン修飾複合体との相互作用を介して遺伝子発現のエピジェネティックな制御に関与し、系譜特異的な転写プログラム、細胞周期の進行、分化に影響を与えます。PHF6依存的な制御ネットワークの破綻は、造血および神経発生過程の変化と関連づけられており、Phf6は転写制御異常を研究するうえで有用な結節点となります。マウスモデルでは、Phf6の機能攪乱は、ゲノム安定性、クロマチン構造、疾患関連の遺伝子発現シグネチャーの観点から検討されることが一般的です。

PHF6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPhf6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Phf6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Phf6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PHF6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PHF6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Phf6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PHF6の機能に不可欠なPhf6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Phf6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PHF6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPHF6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Phf6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PHF6 HDRプラスミド（m）および PHF6 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPhf6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPhf6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。